( 804) # 22Б2804
Автор(ы): Wang S.-C., Morris M. D.
Заглавие: Влияния жесткости сегментов на капиллярный электрофорез ДНК: изучение поляризации флуоресценции
Оригинальное заглавие: Segmental rigidity effects on DNA capillary electrophoresis: A fluorescence polarization study
Язык: Англ.
Источник: Pittsburgh Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc., New Orleans, La, March 1-5, 1998: PITTCON'98: Book Abstr., 1998, стр.466
Ключевые слова: разделение; ДНК; электрофорез; флуоресценция

Реферат: Жесткость сегментов ДНК играет важную роль в механизме миграции ДНК в капиллярном электрофорезе (КЭ). Обычная видеофлуоресцентная микроскопия дает общие х-ки динамики случайного скручивания, но недостаточна для получения информации о пространственном и временном разрешения для измерения движения сегментов. С целью исследования скручивания сегментов мигрирующей ДНК использовали поляризованную ФЛ включенных красителей. Хотя времена вращат. корреляции нуклеиновых к-т длиной (2-5)*10{3} пар оснований - десятки миллисекунд, ФЛ всегда частично деполяризована. Движения скручивания намного быстрее, чем вращения, и вызывают частичную переориентацию. Кроме того, перенос энергии от красителя к красителю может вносить вклад в анизотропию. Незначит. нагрузки красителем используют, чтобы гарантировать, что доминирующим механизмом деполяризации является движение сегментов, а не перенос энергии между красителями. Средняя ориентация, вызванная электрофоретич. и электроосмотич. миграцией, генерирует компонент анизотропии, к-рый виден даже при электрофорезе небольших мономерных ионов. КЭ использовали для измерения стационарных св-в мигрирующих двухцепочечной линейной ДНК и плазмидной ДНК. Эти измерения дополнили с использованием методов высокоскоростной поляризац. флуоресцентной видеомикроскопии при скорости 60-220 кадров в секунду и низкокадровой микроскопии в высокодинамич. диапазоне в р-рах, содерж. модификаторы вязкости